吃瓜91
柱的操纵及掩护
转自丁香园
1、操纵预柱掩护阐发柱（硅胶在极性活动相/离子性活动相中有必然的消融度）。
2、活动相操纵前必须经脱气和过滤处置。
3、防止活动相构成及极性的猛烈变更。
4、大大都反相吃瓜91
柱的pH不变规模是2～7.5，尽能够或许不逾越该吃瓜91
柱的pH规模。
5、若是操纵极性或离子性的缓冲溶液作活动相，应在尝试终了柱子冲刷清洁，并保管乙腈中。
6、压力降低是须要改换预柱或冲刷吃瓜91
柱的旌旗灯号。
体系注重事变
1、开、关体系，流速应有缓冲（1ml/min→0.8ml/min→0.4ml/min→0ml/min），以避免压力渐变致使柱头填料陷落。
2、活动相是缓冲液体系，不要间接切换到强溶剂，俄然转换到高浓度无机溶剂能够或许会使HPLC活动体系中的缓冲液积淀，如许会致使更大的题目如柱头梗塞、管道梗塞、泵泄露、活塞毁伤或进样阀转轴失灵。应当先用无缓冲活动相（即把缓冲液换成水），冲刷5～10个柱体积今后才改换强溶剂。
3、做完测试后切忌间接用100%无机溶剂冲刷柱子，须用90%水-10%无机溶剂（如活动相是缓冲液，操纵纯水或含5%无机溶剂-水溶液）冲刷最少30min后，用无机溶剂冲刷30min摆布，*后将吃瓜91
柱保管在无机溶剂中。
4、改换吃瓜91
柱前，须对操纵的吃瓜91
柱停止冲刷、均衡后，保管在无机溶剂中（*好是乙腈中）。
5、取下吃瓜91
柱时，应当即将两头封口。
6、除特别环境外，普通都应操纵预掩护柱。
均衡吃瓜91
柱的缘由
反相吃瓜91
柱在颠末出厂测试后是保管在乙腈/水中的，由于吃瓜91
柱在贮存或运输进程中能够或许会干掉，如不停止均衡，样品中含有的一些盐、脂质、含脂物资、腐质酸、疏水卵白质和别的一些生物物资很轻易与HPLC柱发生彼此感化的物资，使这些物资吸附在吃瓜91
柱上，使吃瓜91
柱净化。
若何均衡吃瓜91
柱？
是以在用活动相阐发样品之前，咱们应先操纵10－20倍柱体积的甲醇或乙腈均衡吃瓜91
柱；若是咱们所操纵的活动相中含有缓冲盐，应注重用纯水“过渡”。均衡进程中，将流速迟缓地进步用活动相均衡吃瓜91
柱直到取得不变的基线（缓冲盐或离子对试剂度若是较低，则须要较长的时辰来均衡）。
吃瓜91
柱净化后能够或许呈现的环境？
滞留在吃瓜91
柱中被吸附的样品成份积累到必然水平足以使他们起头构成新的牢固相，偶然候这些阐发物能与这些杂质感化构成必然的分手机理，这些非方针产品的搅扰能被检测器检测到并且能构成吃瓜91
峰，气泡，基线扰动及基线漂移等景象，在吃瓜91
图上呈现“怪峰”，表现为负峰、宽峰、馒头峰、双头峰及前吐舌后拖尾峰和保留时辰会动摇。这些行动凡是只要经由进程平行尝试能力发明。
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柱净化后若何洗濯和再生？
当柱子被净化，它的吃瓜91
行动和没被净化的柱子会有些差别。被净化的柱子能发生反压题目。被净化的反相柱子必须洗濯和再生能力规复本来的操纵前提。
再生被净化HPLC柱子的关头是晓得净化物的性子并且能找到恰当的溶剂来去除。若是净化是由于反复进样时强保留物资的积累引发的，操纵简略的步骤来撤除这些净化物常常能规复其吃瓜91
行动。偶然候，颠末屡次操纵今后的吃瓜91
柱用90～100%的溶剂B（双溶剂反相体系中较强的溶剂）冲刷20个别积能够或许**净化物。比方，柱子中残留的脂质就能用非水溶剂如甲醇、乙晴、四氢呋喃。
普通来讲，一切的洗濯方式都有近似的情势。所用的溶剂都是随溶剂强度增添，常常*后一个溶剂长短常疏水的（如醋酸乙酯乃至是烃），能够或许用来消融非极性物资如脂质和油类。咱们必须保障一系列溶剂中每一个溶剂都能与下一个溶剂互混。洗濯进程要竣事时，必须借助一个中等强度能互混的溶剂而回到原始溶剂体系。比方，异丙醇是一个很是好的作为中心步骤的溶剂，由于它能与正己烷或二氯甲烷互溶又能与水相溶剂互溶。可是异丙醇粘度很是大，必须确保较低的流速以避免使泵压太高。冲刷吃瓜91
柱时，冲刷液由吃瓜91
柱出液端间接接入废液瓶，不能流经检测池，以**测池被净化。
反相吃瓜91
柱不操纵缓冲溶液，请操纵以下溶剂系列再生：
100%甲醇→100%乙腈→75%乙腈-25%异丙醇→100%异丙醇→100%二氯甲烷→100%正己烷→100%二氯甲烷→100%异丙醇→100%乙腈。
反相吃瓜91
柱操纵缓冲溶液，请操纵以下溶剂系列再生：
水→乙腈→氯仿（或异丙醇）→乙腈→水。
表 用来冲刷的溶剂体积、时辰
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柱尺寸 柱体积 所用溶剂的体积 冲刷时辰
150-4.6 2.5ml 50ml 50min
250-4.6 4.2ml 80ml 80min
每种溶剂最少冲刷20个柱体积。如250mm×4.6mmHPLC阐发柱，能够或许用1ml/min的流速来冲刷，冲刷后操纵不缓冲的活动相停止均衡吃瓜91
柱。
注：若是简略的无机溶剂/水的处置不能够或许完整洗去硅胶外表吸附的杂质，申明吃瓜91
柱严峻净化，冲刷溶剂能够或许用①0.05M稀硫酸，②二甲基亚砜（DMSO），③二甲基甲酰铵-水（50：50），用低于0.5ml/min的流速冲刷很是有用。